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    1.母種培養(yǎng)基制作

    A 母種培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200-250克，葡萄糖15-20克，瓊脂20克，蛋白胨5克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂1克，VB1五片，VB6一片，VB12一片，水1000毫升，PH6.8或自然。

    B 制作及滅菌：土豆煮沸25分鐘過(guò)濾取濾清液，加入其它輔料微火溶化，趁熱加入空白試管中，18x180的試管加8毫升，20x200的試管加10-12毫升。每7-10支試管用繩子捆扎，試管口端包扎牛皮紙或無(wú)紡布。采用手提式高壓鍋的，排氣閥不要關(guān)閉，當(dāng)燒至蒸汽從排氣閥穩(wěn)定冒出2-3分鐘后，關(guān)閉排氣閥，待壓力升至0.5公斤時(shí)，打開(kāi)排氣閥放掉冷空氣，讓壓力回至零，重新關(guān)閉排氣閥升壓至1.4公斤開(kāi)始計(jì)時(shí)，滅菌30-32分鐘結(jié)束。讓其自然降壓降溫到80-90度時(shí)，輕輕地打開(kāi)鍋蓋，移開(kāi)一條縫，讓鍋里的余熱把包扎試管的被蒸汽弄濕的牛皮紙烘干，在試管的溫度差不多60度時(shí)取出，一頭放在一根1.3-1.5厘米高的木條上，讓其自然冷卻后就成為斜面。
    添加瓊脂的培養(yǎng)基的特性：在95度時(shí)成為液體狀，低于45度時(shí)凝固成固體狀。瓊脂的這個(gè)特性，現(xiàn)在已被廣泛的應(yīng)用于生物培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)。

    2.液體菌種的培養(yǎng)方法

    常見(jiàn)的有采用搖床來(lái)生產(chǎn)的搖瓶培養(yǎng)法和采用發(fā)酵罐來(lái)生產(chǎn)的深層培養(yǎng)法。若少量生產(chǎn)，可以用搖瓶培養(yǎng)法。深層培養(yǎng)需要一整套工業(yè)發(fā)酵設(shè)備，如鍋爐、空氣壓縮機(jī)、空氣凈化系統(tǒng)、發(fā)酵罐等，故投資大，只適用于工廠化的大規(guī)模生產(chǎn)。而搖瓶培養(yǎng)投資少，設(shè)備技術(shù)簡(jiǎn)單，適合一般菌種廠生產(chǎn)使用。本節(jié)主要介紹搖瓶培養(yǎng)的技術(shù)方法。

    液體培養(yǎng)基配方：

    A 土豆200克，葡萄糖10克，蛋白胨3克，磷酸二氫鉀1.5克，瓊脂0.5克，維生素B1 二至五片，PH值6.8或自然，水1000毫升。土豆煮沸騰后25分鐘，過(guò)濾，加入其它營(yíng)養(yǎng)輔料。

    B 免煮配方1：蛋白胨13克，葡萄糖15克，磷酸二氫鉀1.5克，瓊脂0.5克，維生素B1 二至五片，PH值6.8或自然，水1000毫升。

    C 免煮配方2：蛋白胨10克，酵母粉10克，玉米淀粉3克，葡萄糖10克，磷酸二氫鉀1.5克，瓊脂0.5克，Vb1-6片。PH6.8-7.水1000毫升。

    3.搖瓶振蕩培養(yǎng)技術(shù)

    培養(yǎng)液配制好后，裝入500mL容量的三角燒瓶中，每瓶裝量為100mL（旋轉(zhuǎn)式搖床裝量為350毫升），或者一個(gè)500毫升的鹽水瓶裝200-400毫升營(yíng)養(yǎng)液，每瓶加入菜油5滴，起消泡作用。加棉塞后再包扎牛皮紙或無(wú)紡布封口，在1.4kg/cm2壓力下滅菌30-35分鐘，取出冷卻到30℃以下時(shí)，無(wú)菌條件下接入3-4塊約0.5厘米見(jiàn)方的斜面菌種，于20℃～22℃下靜置培養(yǎng)48-72小時(shí)，見(jiàn)菌種塊上菌絲萌發(fā)置于往復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為80～100次/分，振幅6cm～10cm。如果用旋轉(zhuǎn)式搖床，振幅4厘米，振蕩頻率為120～200轉(zhuǎn)／分。培養(yǎng)室溫控制在20℃～21℃，蟲(chóng)草液體菌種的培養(yǎng)時(shí)間一般是在4天左右（食用菌在5-7天）。培養(yǎng)結(jié)束的標(biāo)準(zhǔn)是：培養(yǎng)液清澈透明，液基中懸浮著大量小菌絲球，并伴有各種菌類特有的香味。

    4.手搖培養(yǎng)液體菌種技術(shù)

    如果沒(méi)有搖床設(shè)備，可以用手搖來(lái)解決，每天搖2-5次，每次搖1-3分鐘，搖得多，菌絲也生長(zhǎng)得快。可以把幾十個(gè)瓶子放在搖籃或吊床上一起搖。

    5.接種針

    用一根直徑2.5毫米的不銹鋼電焊條，前三分之一磨小，頭部磨尖，離針尖0.4-0.5厘米處用鋼鉗折彎90度就行，后面手把部分用塑料牙刷柄制作，方法是，將接種針尾端燒紅，插入牙刷柄即可。

    6.滅菌注意事項(xiàng)

    采用壓力鍋滅菌母種用試管培養(yǎng)基和三角瓶時(shí)，必須用蒸格隔開(kāi)，家用壓力鍋矮，試管只能斜放。蓋上蓋后，等蒸汽從鍋中央的孔中冒出來(lái)10分鐘后，蓋上限壓閥，待限壓閥上汽后開(kāi)始計(jì)時(shí)，需要35-38分鐘的滅菌時(shí)間，此時(shí)，應(yīng)改為小火燒，維持限壓閥似起非起的狀態(tài)，一定要有少量蒸汽從中間的限壓閥中冒出，如沒(méi)有蒸汽冒出，那就會(huì)造成滅菌溫度不到位，滅菌不徹底。如果是滅菌米飯或小麥培養(yǎng)基，1公斤以上壓力60-90分鐘。

   7.批量生產(chǎn)栽培的滅菌 （袋栽平菇等食用菌的滅菌可進(jìn)行參考。）

    裝好瓶袋后，除寒冷的冬天外，一般必須立即進(jìn)行上鍋滅菌，將料袋堆積于滅菌平臺(tái)或灶倉(cāng)內(nèi)，料袋行之間必須留有空隙，以利蒸汽在料袋間穿透，不造成滅菌死角，最好用周轉(zhuǎn)筐。碼好堆后，蓋上雙層塑料薄膜，再蓋上無(wú)紡布保溫，最外層再覆上一層塑料薄膜，滅菌堆四周仔細(xì)壓上砂袋，防止蒸汽逃逸。通入蒸汽，用旺火盡快使料堆升溫至100度，料堆內(nèi)蒸汽飽和時(shí)，覆蓋的薄膜會(huì)鼓起成氣包狀，剛開(kāi)始時(shí)，需排掉堆內(nèi)的冷空氣，料堆內(nèi)才會(huì)慢慢的達(dá)到100度，此后，再維持6-10小時(shí)（食用菌10-12小時(shí)），才能達(dá)到徹底滅菌的效果。此時(shí)才可以停火，燜一天，待料溫下降至50-60度時(shí)出鍋為最好，盡量不要在料瓶溫度很高時(shí)出鍋。